大鼠F-框蛋白32(FBXO32)ELISA試劑盒
簡(jiǎn)介
F-框蛋白32（FBXO32），也被稱為 MAFbx，表示“肌肉萎縮F-box基因”，是由FBXO32基因編碼的蛋白質(zhì)，該基因編碼F-box蛋白家族的成員，其特征在于大約40個(gè)氨基酸基序F-box，F(xiàn)-box蛋白構(gòu)成稱為SCF(SKP1-cullin-F-box)的泛素蛋白連接酶復(fù)合物的四個(gè)亞基之一，其在磷酸化中起作用依賴性泛素化，F(xiàn)-box蛋白分為3類：包含WD-40結(jié)構(gòu)域的Fbws、 包含富含亮氨酸重復(fù)序列的Fbls和包含不同蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用模塊或 沒有可識(shí)別基序的Fbxs，該基因編碼的蛋白質(zhì)屬于Fbxs類，含有一個(gè)F-box結(jié)構(gòu)域，這種蛋白質(zhì)在肌肉萎縮期間高度表達(dá)，而缺乏這種基因的小鼠被發(fā)現(xiàn)對(duì)萎縮有抵抗力，因此，這種蛋白質(zhì)是治療肌肉萎縮的潛在藥物靶點(diǎn)，該基因的可變剪接導(dǎo)致兩個(gè)轉(zhuǎn)錄變體編碼兩種不同大小的同工型。
本試劑盒大鼠FBXO32免疫測(cè)定是一種三步法固相夾心ELISA，用于測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清和血漿中的大鼠FBXO32。試劑盒包含大腸桿菌表達(dá)重組大鼠FBXO32和針對(duì)重組蛋白產(chǎn)生的抗體。使用天然大鼠FBXO32獲得的結(jié)果顯示出與使用重組標(biāo)準(zhǔn)品獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線平行的線性曲線。這些結(jié)果表明，該試劑盒可用于測(cè)定天然大鼠FBXO32的相對(duì)質(zhì)量值。
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物FBXO32，孵育清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色液后，若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色，則加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)OD值，顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中FBXO32的濃度。
雙抗體夾心模式圖
按操作順序形成抗體夾心結(jié)構(gòu)后，加入TMB 底物，板孔液體由無色變成藍(lán)色，再加入終止液變?yōu)辄S色后進(jìn)行吸光度值測(cè)定。
檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的局限性
僅供科研使用，不能用于臨床診斷或治療。
試劑盒的使用期限不得超過試劑盒標(biāo)簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合使用或替換使用。
如果樣品產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則用測(cè)定稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品，并重復(fù)測(cè)定。稀釋劑、實(shí)驗(yàn)員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合變化。
樣本采集、處理和存儲(chǔ)的變化可能會(huì)導(dǎo)致樣本值的差異。
本試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)消除了不同生物樣品中可能潛在的干擾因素的影響，但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點(diǎn)
混合蛋白質(zhì)溶液時(shí)，應(yīng)始終避免起泡。為了避免交叉污染，在添加每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和試劑時(shí)應(yīng)更換移液器槍頭。此外，每種試劑應(yīng)單獨(dú)使用容器。
確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在孵育步驟中需要粘合好封板膜。
當(dāng)使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉(zhuǎn)180度，可以提高測(cè)定精度。
顯色劑應(yīng)保持無色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應(yīng)從無色變?yōu)樗{(lán)色。
應(yīng)按照與顯色劑相同的順序?qū)⒔K止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。綠色的孔表示終止液未與基質(zhì)溶液充分混合。
試劑盒組成及儲(chǔ)存條件
需要的其他材料
?酶標(biāo)儀，包含450nm測(cè)定波長(zhǎng)，同時(shí)包含600-680nm校正波長(zhǎng)更佳；
?移液器及槍頭；
?蒸餾水或去離子水
?100-1000 mL刻度量筒。
?洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)。
?水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度。
?用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
注意事項(xiàng)
此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應(yīng)謹(jǐn)慎操作。
該試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會(huì)引起皮膚過敏反應(yīng)，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
顯色劑B可能會(huì)引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服、眼睛和面部防護(hù)用品。處理后徹底洗手。
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