簡(jiǎn)介
<br />轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）是一種多功能的細(xì)胞因子，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子超家族，TGFB蛋白由所有白血球系產(chǎn)生。被激活的TGF-β與其他因子復(fù)合形成絲氨酸/蘇氨酸激酶復(fù)合物，與TGF-β受體結(jié)合。TGF-β受體由1型和2型受體亞單位組成。TGF-β結(jié)合后，2型受體激酶磷酸化并激活1型受體激酶，從而激活一個(gè)信號(hào)級(jí)聯(lián)。這導(dǎo)致不同的下游底物和調(diào)節(jié)蛋白的激活，誘導(dǎo)不同靶基因的轉(zhuǎn)錄，在分化、趨化、增殖和許多免疫細(xì)胞的激活中發(fā)揮作用。TGF-β由包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型分泌，呈潛伏狀態(tài)，與另外兩種多肽--潛伏的 TGF-β結(jié)合蛋白（LTBP）和潛伏的相關(guān)肽（LAP）復(fù)合。血清蛋白酶如漿蛋白酶催化活性TGF-β從復(fù)合物中釋放。這通常發(fā)生在巨噬細(xì)胞的表面，潛伏的TGF-β復(fù)合物通過其配體血栓軟骨素-1（TSP-1）與CD36結(jié)合。激活巨噬細(xì)胞的炎癥刺激物通過促進(jìn)血漿蛋白的激活而增強(qiáng)活性TGF-β的釋放。巨噬細(xì)胞還可以內(nèi)吞由漿細(xì)胞分泌的IgG結(jié)合的潛伏TGF-β復(fù)合物，然后將活性 TGF-β釋放到細(xì)胞外液中。其主要功能之一是調(diào)節(jié)炎癥過程，特別是在腸道。TGF-β還在干細(xì)胞分化以及T細(xì)胞調(diào)節(jié)和分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。由于其在免疫和干細(xì)胞調(diào)節(jié)和分化中的作用，它是癌癥、自身免疫性疾病和傳染病領(lǐng)域中研究較多的一種細(xì)胞因子。TGF-β超家族包括內(nèi)源性生長(zhǎng)抑制蛋白；TGF-β表達(dá)的增加往往與許多癌癥的惡性程度和細(xì)胞對(duì)TGF-β的生長(zhǎng)抑制反應(yīng)的缺陷相關(guān)。其免疫抑制功能的失調(diào)也與自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，盡管其作用是由存在的其他細(xì)胞因子的環(huán)境介導(dǎo)的。
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本試劑盒大鼠TGF-β免疫測(cè)定是一種三步法固相夾心ELISA，用于測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清和血漿中的大鼠TGF-β。試劑盒包含大腸桿菌表達(dá)重組大鼠TGF-β和針對(duì)重組蛋白產(chǎn)生的抗體。使用天然大鼠TGF-β獲得的結(jié)果顯示出與使用重組標(biāo)準(zhǔn)品獲得的標(biāo)準(zhǔn)曲線平行的線性曲線。這些結(jié)果表明，該試劑盒可用于測(cè)定天然大鼠TGF-β的相對(duì)質(zhì)量值。
檢測(cè)原理
試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術(shù)：將捕獲抗體包被于酶標(biāo)板上，捕獲樣品及標(biāo)準(zhǔn)品中的待測(cè)物TGF-β，孵育清洗后，再加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行孵育后清洗，形成“捕獲抗體-抗原-檢測(cè)抗體”免疫復(fù)合物，隨后加入鏈霉親和素偶聯(lián)的辣根過氧化物酶進(jìn)行孵育，待孵育結(jié)束后清洗，接著加入TMB顯色液后，若樣本中有待測(cè)物則顯藍(lán)色，則加入終止液停止反應(yīng)。檢測(cè)過程中游離的成分均被洗去，用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)OD值，顏色的深淺和樣品中的待測(cè)物的含量呈正比，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中TGF-β的濃度。
雙抗體夾心模式圖
按操作順序形成抗體夾心結(jié)構(gòu)后，加入TMB 底物，板孔液體由無色變成藍(lán)色，再加入終止液變?yōu)辄S色后進(jìn)行吸光度值測(cè)定。
檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的局限性
僅供科研使用，不能用于臨床診斷或治療。
試劑盒的使用期限不得超過試劑盒標(biāo)簽上的有效期。不要將試劑與其他批次或來源的試劑混合使用或替換使用。
如果樣品產(chǎn)生的值高于最高標(biāo)準(zhǔn)，則用測(cè)定稀釋劑進(jìn)一步稀釋樣品，并重復(fù)測(cè)定。稀釋劑、實(shí)驗(yàn)員、移液技術(shù)、洗滌技術(shù)、培養(yǎng)時(shí)間或溫度以及試劑盒使用年限的任何變化都可能導(dǎo)致結(jié)合變化。
樣本采集、處理和存儲(chǔ)的變化可能會(huì)導(dǎo)致樣本值的差異。
本試劑盒實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)消除了不同生物樣品中可能潛在的干擾因素的影響，但并不能涵蓋所有潛在影響因素。不能排除存在其他干擾的可能性。
操作要點(diǎn)
混合蛋白質(zhì)溶液時(shí)，應(yīng)始終避免起泡。為了避免交叉污染，在添加每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品、樣品和試劑時(shí)應(yīng)更換移液器槍頭。此外，每種試劑應(yīng)單獨(dú)使用容器。
確保試劑不間斷地添加到板孔中。為了確保準(zhǔn)確的結(jié)果，在孵育步驟中需要粘合好封板膜。
當(dāng)使用自動(dòng)洗板機(jī)時(shí)，在加入洗滌緩沖液后加入30秒的浸泡期，或者在洗滌步驟之間將板旋轉(zhuǎn)180度，可以提高測(cè)定精度。
顯色劑應(yīng)保持無色，直到添加到板中。確保顯色劑不受光線照射。顯色劑應(yīng)從無色變?yōu)樗{(lán)色。
應(yīng)按照與顯色劑相同的順序?qū)⒔K止液添加到板中。加入終止液后，孔中形成的顏色將從藍(lán)色變?yōu)辄S色。綠色的孔表示終止液未與基質(zhì)溶液充分混合。
試劑盒組成及儲(chǔ)存條件
需要的其他材料
?酶標(biāo)儀，包含450nm測(cè)定波長(zhǎng)，同時(shí)包含600-680nm校正波長(zhǎng)更佳；
?移液器及槍頭；
?蒸餾水或去離子水
?100-1000 mL刻度量筒。
?洗瓶、排槍或自動(dòng)微孔板清洗機(jī)。
?水平軌道微孔板振蕩器，能夠保持500±50 rpm的速度。
?用于稀釋標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的試管。
注意事項(xiàng)
此試劑盒提供的終止液為稀硫酸溶液，具有一定腐蝕性，應(yīng)謹(jǐn)慎操作。
該試劑盒中的某些成分含有防腐劑，可能會(huì)引起皮膚過敏反應(yīng)，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
顯色劑B可能會(huì)引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應(yīng)佩帶口罩避免吸入薄霧。
佩戴防護(hù)手套、防護(hù)服、眼睛和面部防護(hù)用品。處理后徹底洗手。
| 產(chǎn)品簡(jiǎn)介 |
<br />轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）是一種多功能的細(xì)胞因子，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子超家族，TGFB蛋白由所有白血球系產(chǎn)生。被激活的TGF-β與其他因子復(fù)合形成絲氨酸/蘇氨酸激酶復(fù)合物，與TGF-β受體結(jié)合。TGF-β受體由1型和2型受體亞單位組成。TGF-β結(jié)合后，2型受體激酶磷酸化并激活1型受體激酶，從而激活一個(gè)信號(hào)級(jí)聯(lián)。這導(dǎo)致不同的下游底物和調(diào)節(jié)蛋白的激活，誘導(dǎo)不同靶基因的轉(zhuǎn)錄，在分化、趨化、增殖和許多免疫細(xì)胞的激活中發(fā)揮作用。TGF-β由包括巨噬細(xì)胞在內(nèi)的許多細(xì)胞類型分泌，呈潛伏狀態(tài)，與另外兩種多肽--潛伏的 TGF-β結(jié)合蛋白（LTBP）和潛伏的相關(guān)肽（LAP）復(fù)合。血清蛋白酶如漿蛋白酶催化活性TGF-β從復(fù)合物中釋放。這通常發(fā)生在巨噬細(xì)胞的表面，潛伏的TGF-β復(fù)合物通過其配體血栓軟骨素-1（TSP-1）與CD36結(jié)合。激活巨噬細(xì)胞的炎癥刺激物通過促進(jìn)血漿蛋白的激活而增強(qiáng)活性TGF-β的釋放。巨噬細(xì)胞還可以內(nèi)吞由漿細(xì)胞分泌的IgG結(jié)合的潛伏TGF-β復(fù)合物，然后將活性 TGF-β釋放到細(xì)胞外液中。其主要功能之一是調(diào)節(jié)炎癥過程，特別是在腸道。TGF-β還在干細(xì)胞分化以及T細(xì)胞調(diào)節(jié)和分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。由于其在免疫和干細(xì)胞調(diào)節(jié)和分化中的作用，它是癌癥、自身免疫性疾病和傳染病領(lǐng)域中研究較多的一種細(xì)胞因子。TGF-β超家族包括內(nèi)源性生長(zhǎng)抑制蛋白；TGF-β表達(dá)的增加往往與許多癌癥的惡性程度和細(xì)胞對(duì)TGF-β的生長(zhǎng)抑制反應(yīng)的缺陷相關(guān)。其免疫抑制功能的失調(diào)也與自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)，盡管其作用是由存在的其他細(xì)胞因子的環(huán)境介導(dǎo)的。
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用戶評(píng)論(共6條評(píng)論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原，定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。
ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
以上代測(cè)費(fèi)，凡購買本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測(cè)！
凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測(cè)指標(biāo)（白介素類、激素類）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?，將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中的常見問題
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無信號(hào)
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可能原因
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解決方法
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試劑添加順序錯(cuò)誤或試劑配制有誤
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重復(fù)實(shí)驗(yàn)
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檢查試劑配制方法
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復(fù)核試驗(yàn)試劑添加流程
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HRP被疊氮化合物污染
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用新鮮配制的試劑
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體用量不足
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使用推薦的抗體量
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邊緣效應(yīng)
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可能原因
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解決方法
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孵育溫度不均衡
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孵育時(shí)使用封板膠紙
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勿在環(huán)境溫度變化大的地方孵育
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顯示緩慢
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可能原因
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解決方法
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酶標(biāo)板未處于正確溫度下
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確保使用前酶標(biāo)板和試劑處于室溫下
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溶液污染
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避免使用含NaN3的試劑
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高背景信號(hào)
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可能原因
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解決方法
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洗板不充分
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洗滌緩沖液加入孔中洗滌，確保洗滌充分
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確保在洗滌前棄掉了所有殘留抗體溶液
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樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中含干擾物
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設(shè)置空白對(duì)照
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沖液受污染
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重新配制緩沖液
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板間重復(fù)性差
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可能原因
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解決方法
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洗板不充分
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將洗滌緩沖液加入孔中洗滌，確保洗滌充分
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確保已在洗滌前棄掉所有殘留溶液
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孵育溫度發(fā)生變化
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嚴(yán)格按照推薦的溫度孵育
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勿在環(huán)境溫度變化大的地方孵育
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操作流程改變
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嚴(yán)格按照相同的操作流程
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封板膠紙重復(fù)使用導(dǎo)致HRP殘留污染
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每一步均使用新的封板膠紙
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整版讀數(shù)偏低
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可能原因
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解決方法
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酶標(biāo)儀波長(zhǎng)設(shè)置不正確
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檢查酶標(biāo)儀參數(shù)設(shè)置
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包被的酶標(biāo)板超過使用效期
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更換新批次試劑盒
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找尋抗體，試劑，細(xì)胞裂解液，試劑盒
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