基本信息
細(xì)胞品牌 : 酶聯(lián)生物
種屬來源 : 人
細(xì)胞編號 : ml-CC2051
組織來源 : 皮膚
生長特性 : 貼壁生長
細(xì)胞形態(tài) : 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞代數(shù) : 10代以內(nèi)
細(xì)胞規(guī)格 : 1x10?cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測 : 無
培 養(yǎng) 基 : RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBSNCI-H460/cis完全培養(yǎng)基
重要提醒 : 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基是不含藥物的，待細(xì)胞狀態(tài)良好，穩(wěn)定生長時，可以用含加含40nM的吉西他濱藥物培養(yǎng)基處理48h，期間若有部分細(xì)胞懸浮起來，屬于正常情況，通過換液去掉即可。凍存時請不要在培養(yǎng)基中加藥物。
培養(yǎng)條件 : 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
傳代方法 : 1：2傳代
凍存條件 : 無血清凍存液，液氮儲存
發(fā)貨方式 : 復(fù)蘇發(fā)貨（免運(yùn)輸費(fèi)用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)用）
供應(yīng)范圍 : 僅限于科研實驗使用，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用
特別說明 : 具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主
觀察
1、收到細(xì)胞后，請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的細(xì)胞名稱一致以及培養(yǎng)
瓶是否有破損或漏液等異常情況。
處理
1、75%酒精棉球擦拭T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2、顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40x,100x,200x各一張）前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
3、不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞放入37度培養(yǎng)箱中靜置3-4小時后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
4、收到細(xì)胞后，及時查看說明書是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞形態(tài)，并按常規(guī)貼壁或懸浮細(xì)胞的傳代方法操作。
貼壁
未超過80%匯合度時，將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞
培養(yǎng)步驟。首次傳代，建議1:2傳代（兩個T25）。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培
養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基，進(jìn)行對比培養(yǎng)。）
特殊細(xì)胞注意事項
個別細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正常現(xiàn)象。請將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清（后期對比培養(yǎng)使用），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加 5ml 完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：如收到密封培養(yǎng)瓶，處理完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)時要將培養(yǎng)瓶蓋子擰松。
凍存細(xì)胞到貨處理
1、收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問題，請即時聯(lián)系。
2、將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至液氮或－80度冰箱保存，建議盡早復(fù)蘇。
3、復(fù)蘇第一管如有活性狀態(tài)問題及時與我們聯(lián)系，會有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)后再復(fù)蘇第二管。
特別說明：未與我方聯(lián)系擅自復(fù)蘇第二管出現(xiàn)問題不予售后。
細(xì)胞復(fù)蘇
1、 從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、棄上清，沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸，接種T25培養(yǎng)瓶，于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min。
3、棄上清，沉淀細(xì)胞用1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個T25），補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
細(xì)胞凍存
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次。
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5mi。
3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml/支的富衡無血清凍存液（FH7001），混勻后加入凍存管中。
（如：凍一支，加入1ml無血清凍存液）
4、 將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱
存放24小時以上。
售后服務(wù)
細(xì)胞予重發(fā)
1. 細(xì)胞運(yùn)輸中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)。
2. 收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)。
3. 收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)。
4. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置2小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)。
5. 常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置22小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇2天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)。
6. 細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品3天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)。
細(xì)胞不重發(fā)
1. 客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)。
2. 客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
3. 非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)。
4. 細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前3天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)。
5. 細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)。
6. 收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)。
特別說明
客戶買細(xì)胞就找上海酶聯(lián)生物，穩(wěn)定傳代，無污染，包存活，提供整體課題外包服務(wù)，光學(xué)成像，流式實驗，電鏡實驗，動物實驗，病理實驗，分子生物學(xué)實驗，細(xì)胞實驗等，嚴(yán)格把控產(chǎn)品質(zhì)量，所有細(xì)胞產(chǎn)品均有細(xì)胞鑒別、無菌檢查、支原體檢查，為科研人員提供可靠放心的產(chǎn)品。
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