IFRS1大鼠雪旺細胞
Catalogue No : C1448
Product Format : a T25 flask
Culture Properties： 貼壁
Complete Growth Medium : 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere : air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application : Cells and cancer research
NOTE : FOR RESEARCH USE ONLY
Operation steps for cell culture：
1. 吸走用于培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；
2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導(dǎo)致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞完全漂浮?；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
4. 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例 : 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。
Cell cryopreservation：
1. 凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）
2. 降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。
Tips：
1. 細胞經(jīng)過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
2. 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
3. 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（最高不超過20%），也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài)，選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4. 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞完全漂浮?？蛻粝^度導(dǎo)致細胞死亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費售后服務(wù)。
5. 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費售后服務(wù)。
6. 細胞狀態(tài)正常時，應(yīng)盡快凍存細胞保種，凍存后應(yīng)隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細胞導(dǎo)致死亡負責，客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務(wù)。
Notice：
客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們，細胞收到后1周內(nèi)沒有任何電話，或其他形式回訪，默認為細胞質(zhì)量沒問題，之后出了任何問題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次，若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費補發(fā)，細胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。
用戶評論(共6條評論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實驗優(yōu)化和改進，積累了大量的經(jīng)驗，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團隊。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對血清及其它樣本定量檢測抗原，定性檢測特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢。
ELISA檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進行樣本檢測。
以上代測費，凡購買本公司試劑盒，我們免費代測！
凡購買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測試劑盒，您只需將需要檢測的動物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測指標（白介素類、激素類）及標本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標本當日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測報告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進步，為中國檢測事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗。
二、樣本要求
在收集標本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集標本，請造模取材后，將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測放免標本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項請與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標本：標本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
三、寄標本時需注明以下情況：
1、標本編號；2、所測項目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實驗后標本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負責，如因客戶提供的材料及信息不準確而引起的實驗延誤或經(jīng)濟損失由客戶承擔。
為什么要進行細胞系的STR鑒定
什么是細胞系鑒定？
所謂細胞系鑒定即通過
STR（短串聯(lián)重復(fù)）圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一株細胞系的遺傳特征確立后，細胞系可以通過定期的檢測，以防止出現(xiàn)細胞系被誤認或交叉污染的情況。
為什么要進行細胞系鑒定？
首先進行細胞系
STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細胞來進行，據(jù)估計，15-20%的實驗室，實驗中所使用的細胞已經(jīng)不是原來的細胞系，或者與其它細胞系發(fā)生了交叉污染。顯然，細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤，將會極大的威脅著基于這些細胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此，很多細胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細胞系進行鑒定，并對細胞系之間的交叉污染進行監(jiān)測。
什么細胞最容易污染別的細胞？
Hela細胞。五十多年來，Hela細胞系被廣泛用于醫(yī)學和生物學領(lǐng)域的研究，對當代生命科學的發(fā)展屢建奇功，是名副其實的生物學研究的親歷踐行者。同時很多被廣泛研究的細胞系都被Hela細胞淹沒，因為她長得快，當你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細胞突然長得很好，而以后都用它傳代做實驗的話，十之八九是搞錯了。
早在1967年，遺傳學家StanleyGartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT407這兩種細胞系都是生物學領(lǐng)域研究最多的腫瘤細胞系——Hela細胞。
有哪些細胞曾被
Hela污染？
lnt-407、HEp-2、WISH（人羊膜細胞）、Acc-M（人原發(fā)性延腺癌細胞）、Bcap-37
（人乳腺癌細胞）、HAC-84（人肺腺癌克?。?、Hepatoma（人肝癌細胞）、HUL-42（人肺腺癌細胞）、CNE（人鼻咽癌細胞）、SPC-A-1（人肺腺癌細胞）、Tca-8113（人舌鱗癌細胞）、YTMLC（個舊肺鱗癌細胞）等一百余種。
如何進行細胞系鑒定？
細胞系鑒定目前主要基于國際身份認證委員會的標準。依據(jù)該標準，可以通過多重熒光
PCR技術(shù)，對人源8個STR位點以及1個性別決定位點進行檢測。我公司做的STR 鑒定，除以上9個位點之外，將對檢測細胞加做12個其它位點信息。
什么時候需細胞系鑒定？
1）當建立或獲得一個新的細胞系時；
2）一個涉及到細胞試驗項目開始/結(jié)束時；
3）在細胞凍存之前，或細胞已連續(xù)培養(yǎng)2～3個月時；
4）發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前；
5）細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時；
6）當實驗室使用超過一種細胞系時，所有細胞系應(yīng)先鑒定以排除交叉污染的可能。
如何提供鑒定樣本？
我公司建議客戶對每種進行檢測的目的細胞復(fù)蘇好
T25培養(yǎng)瓶寄送活細胞，或者對每種需要進行檢測的細胞單獨收集在1.5ml離心管中，細胞數(shù)目不少于10的6次方個。細胞需要離心沉淀，并且以PBS清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基，沉淀進行冰凍（干冰）保存與寄送。（推薦復(fù)蘇好T25培養(yǎng)瓶常溫寄送活細胞，細胞數(shù)目不少于10的6次方個）
如何知道細胞系是否發(fā)生交叉污染了？
如果存在細胞系之間發(fā)生交叉污染，而且鑒定用的細胞可能有兩種以上的細胞系時，那么在進行
STR位點檢測的時候，多個位點會出現(xiàn)兩個以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號強度，理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此，存在交叉污染的混合細胞系中，其中一個位點中某些峰會明顯高于其他的峰，其中大峰是屬于混合細胞系中那個主要細胞系，而小峰則屬于那個次要細胞系。值得注意的是，當發(fā)生兩個或以上細胞混合的時候，檢測結(jié)果看起來非常像細胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當一個細胞系存在亞群時，尤其是一些癌細胞系，由于遺傳不穩(wěn)定的存在，在一些位點的STR特性會不同。因此經(jīng)驗豐富的分子專家是非常重要的，他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜（STR峰圖），從而判斷是否由于發(fā)生細胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。
如何根據(jù)
STR數(shù)據(jù)判斷細胞系的身份？
收到細胞系鑒定結(jié)果以及
STR信息，可以與參考數(shù)據(jù)庫進行比對。如果細胞樣本的每個STR位點和參考細胞STR位點都能重合匹配，即說明該細胞系正確，反之則說明你的細胞系可能被錯誤標記，交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來，匹配度≥80%即可認為該細胞系正確，匹配度＜80%則說明該細胞系的來源需要被懷疑。
提 示 :
如果細胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯誤標記，則需要拿更早代數(shù)的細胞進行鑒定，從而找到問題的起源或者直接從可靠的機構(gòu)購買一株新的細胞系。
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