致瀉性大腸桿菌探針法雙管五重分型qPCR試劑盒(不含內(nèi)參)
產(chǎn)品及特點(diǎn)
致瀉性大腸桿菌(Diarrheagenic Escherichia coli，DEC，致瀉性大腸埃希氏菌)是引起引起腸道內(nèi)急性腹瀉的大腸桿菌統(tǒng)稱。我國(guó)發(fā)生的食物中毒事件中，細(xì)菌性食物中毒的人數(shù)，占總中毒人數(shù)的42.8％，致瀉性大腸桿菌根據(jù)其毒力因子、致病機(jī)理和流行病學(xué)特征可分為5類，分別是腸道聚集性大腸桿菌(Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC)、腸道致病性大腸桿菌(Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC)、腸道侵襲性大腸桿菌(Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌(Shigatoxin-producing Escherichia coli，STEC)或稱為腸道出血性大腸桿菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)、產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC)。感染致瀉性大腸桿菌型別不同，臨床癥狀也有一定的差異，給針對(duì)性治療帶來困擾。因此快速檢測(cè)和對(duì)致瀉性大腸桿菌進(jìn)行分型具有重要意義。本產(chǎn)品就是為滿足此需求的探針法PCR試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。
3. 提供陽性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)致瀉性大腸桿菌DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 可以用于分型，兩管式擴(kuò)增，一次能區(qū)分5種致瀉性大腸桿菌。
6. 用于定量檢測(cè)和分型，不建議用于定量。分型后可以再另購(gòu)定量試劑盒。
7. 本產(chǎn)品足夠100次20μL體系的兩管式5重探針法qPCR反應(yīng)，足夠檢測(cè)50個(gè)樣本（算上對(duì)照，每個(gè)樣本測(cè)兩次）。
8. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分
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成分
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規(guī)格
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包裝
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2×Probe qPCR MasterMix
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0.5 mL×2
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0.5mL本色管
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熒光PCR專用模板稀釋液
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1mL
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1.5mL綠蓋管
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三重致瀉性大腸桿菌探針法qPCR引物-探針混合液干粉（EAEC、EPEC、EIEC）
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50次
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0.5mL棕塑蓋
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雙重致瀉性大腸桿菌探針法qPCR引物-探針混合液干粉（ETEC、STEC）
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50次
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0.5mL棕塑蓋
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EAEC探針法qPCR陽性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL)
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50次
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0.5mL棕塑蓋
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EPEC探針法qPCR陽性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL)
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250uL
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0.5mL黃蓋管
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ETEC探針法qPCR陽性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL)
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250uL
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0.5mL黃蓋管
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STEC探針法qPCR陽性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL)
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250uL
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0.5mL黃蓋管
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超純水
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250uL
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1.5mL藍(lán)蓋管
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使用手冊(cè)
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1份
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無
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本產(chǎn)品采用十一孔盒包裝
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| 保存條件 |
-20℃保存 |
| 自備試劑 |
樣品DNA |
| 保質(zhì)期 |
1年 |
用戶評(píng)論(共6條評(píng)論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原，定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。
ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
以上代測(cè)費(fèi)，凡購(gòu)買本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測(cè)！
凡購(gòu)買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測(cè)指標(biāo)（白介素類、激素類）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?，將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
PCR試劑盒成功的重要要素及注意事項(xiàng)
模板降解
1. 盡量選擇新鮮提取的模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，通過凝膠電泳檢測(cè)模板的完整性，若降解嚴(yán)重需要重新制備模板。
2. 模板避免反復(fù)凍融。
模板中含有抑制 DNA 聚合酶活性的抑制劑
1. 采用離心柱法提取核酸，純化模板，消除抑制劑的干擾。
2. 適當(dāng)減少模板量，采用梯度稀釋摸索最佳模板量。
3. 選用抗逆性強(qiáng)的 DNA 聚合酶。
模板量太低
1. 適當(dāng)增加模板量。
2. 模板為 cDNA 時(shí)，選用目的基因表達(dá)量高的組織提取高質(zhì)量 RNA 并選用基因克隆專用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到的 cDNA 作為模板。
3. 選用靈敏度高的 DNA 聚合酶。
高GC, 復(fù)雜模板
1. 使用 PCR 添加劑（比如 DMSO，甜菜堿）或 GC enhancer，促進(jìn)高 GC，復(fù)雜序列模板雙鏈解離從而有利于引物退火和序列延伸。
2. 增加變性時(shí)間或溫度，使 DNA 雙鏈徹底解離。
3. 選用適用于高 GC，復(fù)雜模板擴(kuò)增的 DNA 聚合酶。
長(zhǎng)片段
1. 確保模板的完整性。
2. 選擇適用于長(zhǎng)片段擴(kuò)增的 Taq DNA 聚合酶或者超強(qiáng)高保真 DNA 聚合酶。
3. 在試劑盒說明書建議的延伸速度基礎(chǔ)上適當(dāng)延長(zhǎng)延伸時(shí)間。
4. 采用抑制熱交錯(cuò) PCR（Suppression Thermo-Interlaced PCR, STI PCR）策略。
引物降解
重新合成高質(zhì)量引物，少量分裝保存，防止多次凍融，避免長(zhǎng)期置于冰箱冷藏部分。
引物設(shè)計(jì)不合理
1. 建議使用引物設(shè)計(jì)軟件（比如Primer premier 6, Oligo 7等）設(shè)計(jì)并選取評(píng)分較高的引物。
2. 確保引物和模板結(jié)合的特異性。
DNA 聚合酶及其他反應(yīng)組分
1. DNA 聚合酶選擇不合適
2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的 DNA 聚合酶，比如分子克隆實(shí)驗(yàn)中涉及到序列的高保真擴(kuò)增，需要選擇一款針對(duì)不同類型序列具有普適性的高保真酶。
DNA 聚合酶活力下降
檢查試劑是否過期，按照說明書要求合理保存試劑。
反應(yīng)緩沖液體系與目的基因不匹配
不同目的 PCR 反應(yīng)要求反應(yīng)緩沖液中的鎂離子、鉀離子、銨離子、化學(xué)添加劑等成分濃度是不一樣的，建議使用試劑盒中優(yōu)化好的緩沖液體系。
反應(yīng)條件
退火溫度不合適，影響引物與模板特異結(jié)合
1. 使用引物設(shè)計(jì)軟件建議的退火溫度，退火溫度一般比引物的 Tm 值低 5 ℃。
2. 不同的試劑鹽離子濃度不同，最佳的退火溫度可能存在差異，建議以軟件建議退火溫度為中心設(shè)置溫度梯度，來獲得最佳退火溫度。
3. 設(shè)置降落 PCR（Step-down）反應(yīng)程序。
其他反應(yīng)條件不合適
不同的 DNA 聚合酶試劑最佳反應(yīng)條件是有差別的，選用試劑說明書建議的變性溫度和時(shí)間，退火時(shí)間，延伸溫度和速度，循環(huán)數(shù)。
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