上海酶聯(lián)酶聯(lián)ELISA試劑盒操作技巧大盤點(diǎn)

<div>上海酶聯(lián)酶聯(lián)<strong>ELISA試劑盒</strong>可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。該法適于測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本，干擾小可以測(cè)到每毫升納克水平的細(xì)胞因子（或受體）的水平。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體，②酶標(biāo)記的抗原或抗體，③酶作用的底物。</div> <div><br /> ELISA試劑盒操作步驟</div> <div>ELISA試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。</div> <div>根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。</div> <div>加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)。</div> <div>甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。</div> <div>每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。</div> <div>甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。ELISA試劑盒重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。</div> <div>每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。</div> <div>取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。</div> <div>在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。</div> <div><br /> 根據(jù)ELISA試劑盒試劑的來(lái)源和標(biāo)本的性狀以及檢測(cè)的具備條件，可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。&nbsp;&nbsp;</div> <div>（一）雙抗體夾心法</div> <div>（二）雙位點(diǎn)一步法</div> <div>（三）間接法測(cè)抗體</div> <div>（四）競(jìng)爭(zhēng)法</div> <div>（五）捕獲法測(cè)IgM抗體</div> <div>（六）應(yīng)用親和素和生物素</div> <div><br /> <strong>ELISA試劑盒</strong>普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗(yàn). 在這種方法中, 通常標(biāo)準(zhǔn)配體是固定的, 通過(guò)加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來(lái)使之成鍵. ELISA試劑盒通過(guò)加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來(lái)定量成鍵的受體, 而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測(cè)量. 第二種抗體能識(shí)別抗體的末端, 在其末端的堿性磷酸酯或過(guò)氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng), 從而使溶液顯色.</div> <div>&nbsp;</div>