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細(xì)胞系（株）的鑒定方法

(一)形態(tài)學(xué)鑒定<o:p></o:p> 1．光學(xué)顯微鏡檢查<o:p></o:p> (1) 培養(yǎng)瓶(皿)或培養(yǎng)板直接置于倒置顯微鏡下觀察，上皮細(xì)胞呈多邊形，邊界清晰，大小規(guī)則，核呈圓形，核質(zhì)比例小，細(xì)胞間排列整齊，為單層培養(yǎng)物，無重疊生長，是正常上皮組織來源；<o:p></o:p> 成纖維細(xì)胞呈長梭形，核小而圓，細(xì)胞排列規(guī)則、整齊，為單層培養(yǎng)物，無重疊生長，是正常間質(zhì)組織來源。腫瘤組織來源的貼壁細(xì)胞，其單層培養(yǎng)物呈多層重疊生長。<o:p></o:p>   (2) 細(xì)胞染色檢查：將無菌小玻片(O．5cm×2cm)于細(xì)胞傳代接種前放人培養(yǎng)瓶皿內(nèi)，接種細(xì)胞懸液后培養(yǎng)，在玻片上制備培養(yǎng)的單層細(xì)胞，然后將載有細(xì)胞的玻片取出，用磷酸鹽緩沖液(phosphate-buffeer saline，PBS)輕輕漂洗后，將玻片放在普通玻片上，空氣中自然干燥。<o:p></o:p> 經(jīng)PBS／甲醇(1：1)固定液同定15min，棄固定液，加吉姆薩(Giemsa)染色液染色10～15min，用清水漂洗干凈，置于空氣中干燥，用二甲苯透明，用光學(xué)樹脂膠片封片后觀察。上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的形態(tài)與直接鏡檢相同，細(xì)胞核染成紫紅或藍(lán)紫色，胞質(zhì)染成粉紅色。<o:p></o:p>   2．電子顯微鏡觀察通常用透射電鏡檢查細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。取對數(shù)生長期的細(xì)胞，用胰蛋白酶消化，加培養(yǎng)液懸浮消化的細(xì)胞，用1000r／min離心5min。<o:p></o:p> 收集離心管底部細(xì)胞，經(jīng)戊二醛固定，包埋，超薄切片；也可采用細(xì)胞原位包埋的方法，將細(xì)胞培養(yǎng)于電鏡用特殊膜上，進(jìn)行固定，包埋，該法不破壞細(xì)胞問排列關(guān)系。在電鏡下可見到上皮細(xì)胞的張力原纖維和橋粒等，腺細(xì)胞可見胞質(zhì)中的分泌顆粒，這對確定培養(yǎng)細(xì)胞系組織來源有重要意義。<o:p></o:p>   (二)細(xì)胞核型分析<o:p></o:p> 細(xì)胞染色體核型分析能簡易、有效地確定細(xì)胞種來源和鑒定正?；驉盒缘男再|(zhì)，以及檢查細(xì)胞有無交叉污染等。細(xì)胞染色體核型分析包括制備中期細(xì)胞分裂象樣本，將分散的單個染色體進(jìn)行計數(shù)和排列分組分析。<o:p></o:p>   1．制備細(xì)胞分裂樣本取對數(shù)生長期的細(xì)胞懸液，加入1×1 0-5 mol／L秋水仙素(終濃度為1×10-7mol／L)到養(yǎng)液中，處理6h后，輕輕吸出培養(yǎng)液，加0．25％胰蛋白酶消化細(xì)胞或手振搖培養(yǎng)瓶使細(xì)胞脫落，收集中期分裂象細(xì)胞，37℃靜置20min后加入冰醋酸一甲醇(1：1)1ml，固定細(xì)胞1～20min，再次以1000r／min離心：10min，去上清液，加入新固定液，吹打混勻，第3次經(jīng)1000r／mln離心10min，收集分裂象細(xì)胞。<o:p></o:p>   2．制備染色體玻片將沉集的細(xì)胞加入O．2ml醋酸甲醇分散細(xì)胞，取一滴細(xì)胞懸液加到冰冷的玻片上，同時用口吹散細(xì)胞液滴，使細(xì)胞均勻分散于玻片上。同時可多制備幾張染色體玻片，待干燥后染色、鏡檢。<o:p></o:p>   3．染色體計數(shù)及核型分析取染色體玻片經(jīng)吉薩姆染色后鏡檢。在顯微鏡下可觀察到多個中期分裂象細(xì)胞染色體，計數(shù)50～100個細(xì)胞染色體數(shù)目，并計數(shù)出細(xì)胞染色體的分布，細(xì)胞群體中分布zui多的染色體數(shù)目是染色體數(shù)。人正常細(xì)胞有46條染色體，為23對二倍體。<o:p></o:p> 染色體分組排列，每組染色體無增加或減少，無異常染色體。小鼠染色體為40條，不僅數(shù)目與人染色體不同，而且以頂端著絲點為主。人的染色體則為中央著絲點，數(shù)目與著絲點位置可作為細(xì)胞系是人或鼠來源的依據(jù)。<o:p></o:p>

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