教你如何挑選抗體

<p>任何意圖靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇規(guī)模選中適宜的抗體，</p> <p><strong>需求考慮如下幾種要素：</strong></p> <p>一、分析試驗(yàn)的運(yùn)用類型 一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過適用于何種分析類型，如：可以運(yùn)用于WB IHC ICC ELASA 分析等，假設(shè)抗體說明書沒有提及的運(yùn)用類型，并不意味著該抗體不適用于此種分析運(yùn)用類型，而僅是說明沒有通過此種分析試驗(yàn)驗(yàn)證，假設(shè)抗體不適用 某些分析試驗(yàn)，則會(huì)在抗體說明書上標(biāo)注出來不適于某分析試驗(yàn)。<br /> 二、 樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì) 了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇zui適宜的抗體，</p> <p><strong>至少兩方面要素需求考慮：</strong></p> <p>1. 待測樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域：抗體是由各種不同免疫原免疫宿主而制備得來，其間的免疫原包含：全長蛋白、蛋白片斷、多肽、全有機(jī)體（如：細(xì)菌）或細(xì)胞，抗體說明書一般都有免疫原的描繪，假設(shè)方案檢測的是蛋白片斷或一種特別的同型物或蛋白全長的某一區(qū)域，則必須選擇用含此片段域的免疫原制備出的抗體。假設(shè)方案用FACS 流式檢測活細(xì)胞的表面蛋白，則需求選擇含該表面蛋白的胞外域來免疫制備的抗體。</p> <p>2. 樣本的提取或處理過程：某些抗體要求樣本通過某些特別處理，例如：許多抗體只辨認(rèn)復(fù)原和變性的、表位已顯露不受二級四級結(jié)構(gòu)阻礙的蛋白樣本，另一方面，某些抗體僅辨認(rèn)天然折疊狀態(tài)的蛋白。當(dāng)選擇免疫組化的抗體時(shí)，應(yīng)留心某些抗體只辨認(rèn)未固定的冷凍的安排，而另一些抗體則適用于無需抗原批改解交聯(lián)步聚的甲醛固定白臘包埋的安排，這些都會(huì)在抗體說明書上運(yùn)用部分標(biāo)明出來。<br /> 三、樣本的物種 應(yīng)選擇物種相同或有交叉反應(yīng)的抗體，抗體可能與不同物種的同種靶蛋白有交叉反應(yīng)，因其氨基酸序列同源性較高，假設(shè)國產(chǎn)ELISA試劑盒樣本的種類未列入抗體說明書上的交叉反應(yīng)種屬表中，并不意味著該抗體不適用于檢測該物種的蛋白，而僅僅表明該物種沒有用此抗體檢測驗(yàn)證過，應(yīng)通過序列比對的方法來預(yù)測交叉反應(yīng)，可運(yùn)用Expasy 和 NCBI BLAST 來進(jìn)行不同物種蛋白同源性比對。</p>