ELISA 的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;ELISA是一種廣泛用于測(cè)定液體樣品中蛋白質(zhì)、抗體或激素的免疫分析技術(shù)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的標(biāo)準(zhǔn)程序通常是將蛋白質(zhì)、抗體或激素（即抗原）直接或用捕獲抗體（captureAb）固定在固相載體上，然后加入一抗（Ab），形成抗原抗體復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)酶標(biāo)記，則可直接用于測(cè)定抗原的量。若沒(méi)有，則可使用另一種酶標(biāo)記的二抗來(lái)測(cè)定抗原的量。測(cè)定抗原量的方法是加入酶的底物，作用后產(chǎn)生的顏色深度與樣品中抗原的量成正比。基于此原理，可計(jì)算出樣品中抗原的總量或濃度。</span></p> <p>&nbsp;</p> <p style="text-align: center;"><span style="font-size: 12px;"><img src="/images/upload/Image/微信圖片_20250331170212.jpg" alt="elisa試劑盒" width="500" height="375" /></span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <h2><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 常用ELISA方法的優(yōu)缺點(diǎn)</span></h2> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 常用的ELISA技術(shù)主要有四種：直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。下文將逐一解釋這些方法的概念、優(yōu)缺點(diǎn)。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">直接法</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測(cè)定抗原的總量，這個(gè)一抗的特異性非常重要。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，無(wú)需使用二抗，可避免交叉反應(yīng)。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點(diǎn)：實(shí)驗(yàn)中的一抗必須用酶標(biāo)記，但并不是每種抗體都適合標(biāo)記，而且成本相對(duì)較高。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 間接法</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 該測(cè)定方法與直接法類似，不同之處在于一抗未經(jīng)酶標(biāo)記，而是使用酶標(biāo)記的二抗來(lái)識(shí)別一抗，從而測(cè)定抗原的量。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優(yōu)點(diǎn)：二抗可以增強(qiáng)信號(hào)，并且針對(duì)不同的檢測(cè)方法有多種選擇。未經(jīng)酶標(biāo)記的一抗可保留最高的免疫反應(yīng)性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點(diǎn)：發(fā)生交互反應(yīng)的概率較高。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; </span><strong><span style="font-size: 12px;">夾心ELISA</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 待檢測(cè)的抗原被包被在兩種抗體之間，其中一種抗體將抗原固定在固相載體上，即捕獲抗體。另一種抗體是檢測(cè)抗體。這種抗體可以用酶標(biāo)記，直接測(cè)定抗原的量；也可以不標(biāo)記，然后用酶標(biāo)記的二抗測(cè)定抗原的量。必須仔細(xì)選擇這兩種抗體，以避免相互作用或競(jìng)爭(zhēng)相同的抗原結(jié)合位點(diǎn)。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、特異性高、無(wú)需事先純化抗原。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點(diǎn)：抗原必須具有兩個(gè)以上的抗體結(jié)合位點(diǎn)。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 競(jìng)爭(zhēng)性ELISA</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 樣品中的抗原（游離抗原）與純化固定在固相載體上的抗原（固定抗原）競(jìng)爭(zhēng)同一種抗體。樣品中游離抗原較多時(shí)，能結(jié)合的抗體較多，而固定抗原則只有較少的抗體能與其結(jié)合，反之亦然。經(jīng)過(guò)清洗步驟后，游離抗原抗體復(fù)合物被洗去，只留下固定抗原抗體復(fù)合物。將結(jié)果與僅有固定抗原的對(duì)照結(jié)果進(jìn)行比較，根據(jù)顏色差異即可計(jì)算出樣品中的抗原。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 優(yōu)點(diǎn)：可以適用于比較不純的樣品，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性很高。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 缺點(diǎn)：總體敏感性和特異性較差。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 總而言之，ELISA技術(shù)因其操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，已成為生物醫(yī)學(xué)研究和臨床診斷中不可或缺的工具。四種主要的ELISA方法，即直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法，各有其優(yōu)缺點(diǎn)，適用于不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮涂乖匦浴Ｑ芯咳藛T需要根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求，例如抗原的純度、可獲得的抗體類型以及所需的靈敏度和特異性，選擇最合適的ELISA方法。對(duì)不同ELISA方法的理解和合理選擇，將有助于獲得更準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的研究進(jìn)展。</span></div>