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解讀QPCR與PCR的核心差異：從定性到定量

PCR是1984年開始出現(xiàn)的一種基因檢測技術(shù)，由于其操作簡便、靈敏度高，被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢測，成為分子生物學(xué)中必不可少的研究工具。傳統(tǒng)的PCR定量，又稱為終點(diǎn)PCR定量，是通過檢測PCR反應(yīng)結(jié)束后（即平臺期）的擴(kuò)增產(chǎn)物量來估算初始模板量。通常采用瓊脂糖凝膠電泳分離PCR產(chǎn)物，并使用熒光染料（如溴化乙錠）染色后，通過比較條帶亮度或使用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。但在PCR反應(yīng)中，由于反應(yīng)體系、反應(yīng)條件等因素，會影響PCR反應(yīng)的效率，甚至?xí)霈F(xiàn)一些非特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物，因此終點(diǎn)PCR定量并不準(zhǔn)確。   <h3>    QPCR簡介<o:p></o:p></h3>       實(shí)時熒光定量PCR（Real-timequantitativePCR，常簡稱為qPCR）是一種常用的定量PCR(qPCR)方法。AppliedBiosystems公司在1996年推出了第一臺商品化的實(shí)時熒光定量PCR儀，極大地推動了該技術(shù)的普及和應(yīng)用。相比于傳統(tǒng)的終點(diǎn)PCR，實(shí)時熒光定量PCR具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、可實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)、自動化程度高、污染風(fēng)險低、可實(shí)時監(jiān)測結(jié)果等特點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)臨床檢測和臨床醫(yī)學(xué)研究中具有重要意義。<o:p></o:p>   <h3>    QPCR與PCR區(qū)別<o:p></o:p></h3>       熒光定量PCR實(shí)時監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光；普通PCR通過檢測插入DNA中的染料（通常是紫外線）的量來測量最終PCR產(chǎn)物的量。<o:p></o:p>       1、實(shí)時熒光定量PCR與傳統(tǒng)PCR反應(yīng)要求不同<o:p></o:p>       熒光定量對擴(kuò)增片段要求較高，一般為100-300bp；普通定量可以擴(kuò)增較長的片段，如果不需要檢測產(chǎn)物分子量，熒光定量可以定量分析產(chǎn)物而不需要電泳，而普通PCR必須進(jìn)行電泳。<o:p></o:p>       2、實(shí)時熒光定量PCR與傳統(tǒng)PCR反應(yīng)結(jié)果不同<o:p></o:p>       熒光定量可以做到精準(zhǔn)定量，而普通PCR做不到。熒光定量可以展示整個擴(kuò)增過程，擴(kuò)增效率，溶解溫度，直接得到標(biāo)準(zhǔn)曲線等，這是普通PCR做不到的。<o:p></o:p>       上述是QPCR和PCR區(qū)別，PCR技術(shù)作為分子生物學(xué)基石，為基因研究提供了重要的技術(shù)支持。而QPCR在此基礎(chǔ)上發(fā)展而來，憑借其定量精準(zhǔn)、實(shí)時監(jiān)測等優(yōu)勢，極大地拓展了PCR技術(shù)的應(yīng)用范圍，尤其在醫(yī)學(xué)診斷、疾病研究等領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的潛力，未來必將在生命科學(xué)領(lǐng)域發(fā)揮更重要的作用。<o:p></o:p>

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