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一文讀懂免疫測(cè)定：原理與用途

免疫測(cè)定是一種生物分析方法，利用抗原和抗體反應(yīng)檢測(cè)給定生物樣本中特定生物分子（從小分子到大分子）的存在和濃度。   　　抗體是生物體針對(duì)病毒、毒素、細(xì)菌等外來物質(zhì)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，具有抗原結(jié)合位點(diǎn)，可以特異性地與分析物與抗原結(jié)合。<o:p></o:p>   　　免疫測(cè)定包括將樣品與試劑（包含與可檢測(cè)標(biāo)記物偶聯(lián)的特定抗體和在競(jìng)爭(zhēng)性測(cè)定中包含標(biāo)記的分析物）混合和孵育。樣品中存在的目標(biāo)分析物與試劑中的標(biāo)記分析物競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。未結(jié)合的分析物和標(biāo)記的分析物保持游離。<o:p></o:p>   　　然后使用諸如固相吸附和洗滌之類的技術(shù)將結(jié)合的（免疫復(fù)合物）和未結(jié)合的部分分離。通過測(cè)量結(jié)合部分或游離部分中標(biāo)記物的活性來確定分析物的濃度。將測(cè)得的信號(hào)與使用已知濃度分析物生成的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而量化樣品中目標(biāo)分析物的濃度。   <img src="/images/upload/Image/抗原抗體相互作用.png" alt="免疫測(cè)定原理" width="500" height="254" /><o:p></o:p>   　　在本文中酶聯(lián)生物將介紹免疫測(cè)定類型、工作原理及應(yīng)用<o:p></o:p>   <h3>　　免疫測(cè)定類型<o:p></o:p></h3>   　　以下是實(shí)驗(yàn)室中用于研究不同生物分子的不同類型的免疫測(cè)定方法：<o:p></o:p>   　　酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：一種酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(EIA)，在生物化學(xué)和免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。在這種試驗(yàn)中，抗原或捕獲抗體被固定在微孔板表面，然后與靶抗原特異性抗體一起孵育。<o:p></o:p>   　　然后使用各種檢測(cè)方法（例如化學(xué)發(fā)光、比色、顯色和熒光測(cè)定）對(duì)抗原-抗體復(fù)合物進(jìn)行可視化。<o:p></o:p>   　　由于酶標(biāo)記抗體的參與，復(fù)合物的可視化成為可能。ELISA測(cè)定中廣泛使用的結(jié)合物包括辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（AP）。它們與合適的底物相互作用，引發(fā)產(chǎn)生可測(cè)量信號(hào)的反應(yīng)。<o:p></o:p>   　　實(shí)驗(yàn)室中使用的ELISA檢測(cè)方法包括夾心ELISA、競(jìng)爭(zhēng)性ELISA、直接ELISA和間接ELISA。由于ELISA具有高靈敏度和高特異性，因此廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用，例如藥物和抗體的高通量篩選。<o:p></o:p>  <img src="/images/upload/Image/酶聯(lián)免疫測(cè)定.png" alt="酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定" width="500" height="200" /> 　　放射免疫分析(RIA)：這是一種高通量技術(shù)，用于實(shí)驗(yàn)室量化藥物、激素和病毒抗原。它使用放射性同位素或放射性同位素標(biāo)記抗體，以識(shí)別目標(biāo)分析物或特定抗原。在這種方法中，未標(biāo)記抗原與放射性標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)與特定抗體結(jié)合。游離放射性標(biāo)記抗原的水平反映了混合物中未標(biāo)記抗原的濃度。<o:p></o:p>   　　化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)：這是一種實(shí)驗(yàn)室用于檢測(cè)各種樣品中的蛋白質(zhì)、肽和激素的生化技術(shù)。在這種分析中，酶將底物轉(zhuǎn)化為發(fā)光而不是產(chǎn)生特定顏色的反應(yīng)產(chǎn)物。發(fā)光是指物質(zhì)從激發(fā)態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛鶓B(tài)時(shí)發(fā)出的光。<o:p></o:p>   　　熒光免疫測(cè)定：這是一種免疫測(cè)定方法，使用熒光分子（如羅丹明B和熒光素）來檢測(cè)一系列生物分子。熒光標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合，產(chǎn)生可測(cè)量的熒光強(qiáng)度，用于確定目標(biāo)分析物的量。<o:p></o:p>   　　計(jì)數(shù)免疫測(cè)定：在這種免疫測(cè)定中，顆粒珠上覆蓋有針對(duì)目標(biāo)抗原的特異性抗體。然后，將其與樣品一起孵育，從而形成抗原抗體復(fù)合物。使用細(xì)胞計(jì)數(shù)器對(duì)未結(jié)合的珠子進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而得出目標(biāo)抗原的濃度。<o:p></o:p>   <h3>　　免疫測(cè)定的工作原理<o:p></o:p></h3>   　　免疫測(cè)定的工作原理是抗原-抗體相互作用?？贵w對(duì)激素、核蛋白和肽等分析物具有高度特異性。使用純?cè)噭r(shí)，會(huì)形成抗原-抗體復(fù)合物，從而成功檢測(cè)分析物。顏色變化表示目標(biāo)分子的存在，顏色強(qiáng)度代表測(cè)試溶液中分析物的量。<o:p></o:p>   　　如今，已開發(fā)出多種免疫測(cè)定方法，例如ELISA、化學(xué)發(fā)光和熒光測(cè)定，用于不同的目的，但它們都有三個(gè)共同組成部分：<o:p></o:p>   <ul> <li>　　目標(biāo)分析物：您想要使用免疫測(cè)定法檢測(cè)的感興趣的抗原。<o:p></o:p></li> <li> </li> <li>　　抗體：這些是針對(duì)目標(biāo)抗原具有高結(jié)合親和力的蛋白質(zhì)。<o:p></o:p></li> <li> </li> <li>　　檢測(cè)標(biāo)記：一種化學(xué)化合物，當(dāng)其附著于抗體或抗原上時(shí)，在抗原抗體反應(yīng)后產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)。其例子包括熒光素、HRP和羅丹明B。<o:p></o:p></li> </ul>   <h3>　　免疫測(cè)定應(yīng)用<o:p></o:p></h3>   　　免疫測(cè)定測(cè)試可廣泛應(yīng)用于各種應(yīng)用，包括醫(yī)學(xué)診斷、環(huán)境測(cè)試和食品安全。<o:p></o:p>   　　它們?cè)诩膊≡\斷中發(fā)揮著重要作用?？捎糜跈z測(cè)患者血液或其他體液中是否存在疾病特異性抗原或抗體，從而幫助醫(yī)療保健提供者診斷和監(jiān)測(cè)各種疾病，包括感染、自身免疫性疾病和癌癥。例如，HIV檢測(cè)是一種免疫測(cè)定，用于檢測(cè)人體血液中是否存在HIV抗體，表明他們已感染該病毒。<o:p></o:p>   　　它們經(jīng)常用于環(huán)境檢測(cè)。幫助檢測(cè)水、空氣和土壤樣本中是否存在污染物、毒素和其他污染物。這對(duì)于監(jiān)測(cè)環(huán)境安全和保護(hù)公眾健康非常重要。例如，這些檢測(cè)可用于檢測(cè)水樣中是否存在鉛和汞等重金屬，以確保它們符合安全標(biāo)準(zhǔn)。<o:p></o:p>   　　它們?cè)谑称沸袠I(yè)中至關(guān)重要，可以檢測(cè)食品中是否存在沙門氏菌和大腸桿菌等食源性病原體。這對(duì)于確保食品供應(yīng)安全和防止食物中毒爆發(fā)至關(guān)重要。此外，它們還可用于檢測(cè)食品中是否存在花生和牛奶等過敏原，以幫助過敏人群避免潛在的危險(xiǎn)情況。<o:p></o:p>   　　了解免疫測(cè)定的原理及其多樣化的應(yīng)用，能使科研人員根據(jù)特定實(shí)驗(yàn)需求（例如目標(biāo)分析物、靈敏度要求、樣品類型和資源）選擇最合適的測(cè)定方法，最終提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。<o:p></o:p>

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